| 山羊先進(jìn)繁殖技術(shù) | |
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不論技術(shù)產(chǎn)生的年代和技術(shù)的成熟程度及運(yùn)用時(shí)間的長(zhǎng)短，下列的技術(shù)都應(yīng)該歸類為先進(jìn)的山羊繁殖技術(shù)：同期發(fā)情、人工授精、超數(shù)排卵和胚胎移植（MOET）、腹腔鏡活體采卵（LOPU）及胚胎的試管或體外生產(chǎn)技（IVP）、轉(zhuǎn)基因和克隆技術(shù)。 上述先進(jìn)繁殖技術(shù)的運(yùn)用使山羊的遺傳進(jìn)展加快。其中的有些技術(shù)（如人工授精和胚胎移植）是通過選擇差的加大而使遺偉進(jìn)展加快，而另外一些技術(shù)，如母羔的試管胚胎技術(shù)（JIVT）是通過縮短世代間隔而使遺傳進(jìn)展加快。這些先進(jìn)的繁殖技術(shù)使高價(jià)值山羊個(gè)休較之在自然繁殖情況下產(chǎn)生更多的后代。而其中有些技術(shù)與同期發(fā)情技術(shù)相結(jié)合，使山羊這種季節(jié)性繁殖動(dòng)物能夠在一年中的任何時(shí)候都能產(chǎn)羔和泌乳。 人工授精是運(yùn)用最廣泛的先進(jìn)繁殖技術(shù)，這種技術(shù)對(duì)全世界家畜的遺傳改進(jìn)作出了最為顯著的貢獻(xiàn)。人工授精技術(shù)結(jié)合適當(dāng)?shù)墓笤u(píng)定方法（后裔測(cè)定），為高價(jià)值基因的傳播提供了相對(duì)簡(jiǎn)單而廉價(jià)的方法。冷凍精液的運(yùn)用使遺傳材料的國(guó)際交換更為容易，并使精液在繁殖季節(jié)和非繁殖季節(jié)都能使用，還延長(zhǎng)了高價(jià)值公羊的有效繁殖生命（死后也能使用）。 人工授精和同期發(fā)情是山羊生產(chǎn)管理中的關(guān)鍵技術(shù)，使配種和分娩時(shí)間集中，能在一年中的預(yù)定時(shí)間銷售肉和奶，這有利于銷售策略的制定和用于其它目的。 超數(shù)排卵和胚胎移植技術(shù)是針對(duì)母畜的，而人工授精是針對(duì)公畜的，也就是說這種技術(shù)使高遺傳價(jià)值的母羊較之在自然繁殖的情況下生產(chǎn)更多的后代。雖然這種說法在理論上是正確的，但由于各式各樣原因，例如成本、技術(shù)要求和該技術(shù)效率的不穩(wěn)定性和不可預(yù)知性，使MOET還不可能成為遺傳改進(jìn)的常用手段。 腹腔鏡活體采卵結(jié)合胚胎的試管生產(chǎn)能夠使高遺傳價(jià)值的母山羊生產(chǎn)更多的后代。這種技術(shù)較之手術(shù)胚胎回收技術(shù)的手術(shù)創(chuàng)傷小，因而在母山羊的繁殖生命中可多次重復(fù)使用該技術(shù)，而且這種技術(shù)的可預(yù)知性要好于超數(shù)排卵技術(shù)。 如果轉(zhuǎn)基因和體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移（SCNT）技術(shù)的效率更高并且成本不太昂貴，就能夠在加快或促進(jìn)遺傳進(jìn)展上發(fā)揮重要作用。目前該技術(shù)在山羊中的應(yīng)用主要是為了產(chǎn)生和繁殖這樣的轉(zhuǎn)基因山羊，其山羊奶中含有高價(jià)值重組藥物蛋白。 現(xiàn)將上述先進(jìn)技術(shù)分別介紹如下： 1 同期發(fā)情 同期發(fā)情是對(duì)母羊群用外源性激素進(jìn)行處理，或通過改變管理措施，使之發(fā)情相對(duì)集中在一定時(shí)間范圍內(nèi)的技術(shù)，亦稱發(fā)情周期化。同期發(fā)情是組成先進(jìn)繁殖技術(shù)綜合方案的關(guān)鍵部分，對(duì)方案總的效率產(chǎn)生重要影響。由于山羊是季節(jié)性繁殖動(dòng)物，因而在非繁殖季節(jié)實(shí)施人工授精、超數(shù)排卵和腹腔鏡活體采卵等技術(shù)時(shí)，同期發(fā)情具有重要的作用。同期發(fā)情技術(shù)的運(yùn)用有利于山羊人工授精的推廣和山羊的品種改良，便于山羊生產(chǎn)的組織和管理及降低配種費(fèi)用。 山羊同期發(fā)情技術(shù)中使用最為廣泛的方法是用孕酮或孕激素處理9~11天，然后在陰道海綿栓取出前48小時(shí)用前列腺素（或類似物）進(jìn)行溶黃體處理。根據(jù)激素處理的有效部位，孕酮或孕激素的處理可通過陰道海綿栓、CIDRA（新西蘭制造，是以尼龍為芯，外面為醫(yī)用彈性硅酮制成，并浸潤(rùn)有天然孕酮）或皮下埋植的方法進(jìn)行。 為了人工授精，也是為了胚胎移植受體的同期發(fā)情，在取出陰道海綿前48小時(shí)，用250~500IU的馬絨毛膜促性腺激素（eCG）（溶黃體制劑）進(jìn)行處理。eCG能夠促進(jìn)卵泡的發(fā)育和同期排卵，使人工授精和胚胎移植在預(yù)定的時(shí)間進(jìn)行。eCG的使用劑量應(yīng)根據(jù)季節(jié)、品種、體重、年齡、期望的產(chǎn)羔數(shù)和個(gè)體在以前對(duì)這種藥物的響應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。 有報(bào)導(dǎo)表明，反復(fù)使用eCG導(dǎo)致在通常確定的人工授精時(shí)間造成受胎率下降。其原因是由于以前的處理所產(chǎn)生的抗eCG的抗體存在造成的。這種抗體的存在顯然與發(fā)情出現(xiàn)時(shí)間的延遲有關(guān)，同期發(fā)情母羊的LH峰值和排卵時(shí)間就說明了受胎率低的原因。 采用孕激素長(zhǎng)時(shí)間處理的方案（18~21天）時(shí)，并不需要使用溶黃體藥物，但會(huì)導(dǎo)致受胎率下降，這可能是由于精子在生殖道的通過速度減慢造成的。 Rubianes et al. (2003)提出使用“短時(shí)間誘導(dǎo)同期發(fā)情方案”，即山羊用孕激素處理5天，在陰道海綿栓或CIDR撤出時(shí)用eCG200~300IU進(jìn)行處理。他認(rèn)為孕激素的處理超過5天會(huì)使大量的大卵泡過度生長(zhǎng)和存在，從而降低人工授精的受胎率。他所提出的“短時(shí)間誘導(dǎo)同期發(fā)情方案”結(jié)合eCG處理，并在撤出陰道海綿栓54小時(shí)進(jìn)行鮮精的人工授精，使受胎率達(dá)到68%。 在發(fā)情時(shí)給予促性腺釋放激素（GnRH）可以使排卵的同步性更好一些(Pierson et al., 2003)。這種方法可以提高人工授精的受胎率，也有利于在特定的發(fā)育階段采集轉(zhuǎn)基因和體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移的卵母細(xì)胞和核顯微注射的受精卵。 2 人工授精 人工授精是最早運(yùn)用的先進(jìn)繁殖技術(shù)，它對(duì)家畜的遺傳改進(jìn)做出了最大的貢獻(xiàn)，因?yàn)樗鼘?duì)于識(shí)別和運(yùn)用高遺傳價(jià)值的公畜提供了最好的方法。精液的三種保存方法（新鮮精液、低溫精液和冷凍精液）和授精的三種技術(shù)（陰道、子宮頸和子宮內(nèi)）已經(jīng)在山羊這種動(dòng)物廣泛應(yīng)用。 當(dāng)公羊本身就在羊群中時(shí)，特別是當(dāng)繁殖季節(jié)中，精液的產(chǎn)量和品質(zhì)都處于最佳狀態(tài)時(shí)，新鮮精液的就是首選的保存方法。當(dāng)范圍不大的地區(qū)有許多養(yǎng)羊戶共同使用一只公羊時(shí)，通常就采用低溫精液的保存方法。在這種情況下，精液可在4度左右保存，保存時(shí)間為24小時(shí)（從采精時(shí)計(jì)算）。冷凍精液是長(zhǎng)期保存方法，它可以一年到頭在非常廣闊的地區(qū)使用，在公羊死后它的遺傳物質(zhì)仍然能夠保存下來。 在20世紀(jì)40~50年代就已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了牛精液的冷凍保存。在這之后，一直摸仿牛冷凍精液的制作方式進(jìn)行山羊精液的冷凍，但效果不好。早在50年代就發(fā)現(xiàn)山羊尿道球腺的分泌物含有卵黃凝集酶。在有鈣元素的情況下，它將卵黃的卵磷脂水解成脂肪酸和溶血卵磷脂。當(dāng)山羊精液的的緩沖液中含有卵黃時(shí)，會(huì)釋放出大量的溶血卵磷脂，它對(duì)山羊精子有很大的毒害作用，因而山羊精液的冷凍技術(shù)是很復(fù)雜的。有人建議山羊精液在冷凍保存前冼滌兩次以除去對(duì)精子活力和呼吸有害的外源性底物。這種冼去精清的技術(shù)提高了冷凍前后試管中精子的存活率，從而提高了山羊冷凍精液的受精率。但是使用不需要冼去精清的稀釋液，可以使山羊冷凍精液的制作過程簡(jiǎn)單一些。近來已經(jīng)開發(fā)出不含生物成分的稀釋液，它能提高山羊精液處理的衛(wèi)生安全性(Hinsch et al., 1997; Gil et al., 2003)。雖然這類稀釋液最初是從牛的稀釋液開發(fā)出來的，但是H. Baldassarre等人在山羊精液冷凍中使用了法國(guó)的Bioexcell產(chǎn)品，結(jié)果表明在山羊精液稀釋前不需要對(duì)其進(jìn)行離心冼滌處理。 一般來說，精液保存的方法就指出了人工授精的首選方法。精子在保存過程中受到的傷害越大，那么輸精的位置就要越深，才能達(dá)到好的受胎率。新鮮精液在陰道內(nèi)輸精是成功的，而對(duì)于冷卻精液和冷凍精液則需要進(jìn)行子宮頸內(nèi)輸精�？墒菫榱诉_(dá)到高的受胎率（高于70%），冷凍精液需要進(jìn)行子宮內(nèi)輸精。對(duì)于許多成年母山羊可以通過子宮頸將精液輸入子宮內(nèi)，而對(duì)于青年母山羊及某些成年母山羊個(gè)體，就只能夠使用腹腔鏡技術(shù)才能達(dá)此目的，這就使輸精技術(shù)變得更為復(fù)雜。 Maxwell等人(1999)證實(shí)，解凍精液在精清中的再懸浮可提高綿羊子宮頸輸精的受胎率。這種方法在山羊的運(yùn)用還未達(dá)到類似的結(jié)果，這有待進(jìn)一步進(jìn)行試驗(yàn)。 人工授精中利用性別精子可增加山羊的繁殖效率，特別對(duì)于奶山羊更是如此，因?yàn)樯a(chǎn)的公羔沒有大的商業(yè)價(jià)值。性別精子的利用在一些畜種都獲得成功，如牛(Seidel et al., 1999)，馬(Buchanan et al., 2000)，豬(Rath et al., 2003)和綿羊(Hollinshead et al., 2002)。但是在山羊還未獲得成功。預(yù)計(jì)這種技術(shù)今后也能運(yùn)用于山羊。。 3 超數(shù)排卵和胚胎移植 人類研究超數(shù)排卵和胚胎移植（MOET）已有100余年歷史，然而，對(duì)畜牧業(yè)產(chǎn)生影響是在20世紀(jì)70年代以后，牛的MOET首先在北美迅速發(fā)展，以后在全世界得到廣泛應(yīng)用。山羊MOET的首次商業(yè)化應(yīng)用是在1973年，當(dāng)時(shí)的新西蘭為了建立本國(guó)的安哥拉山羊群而采用了胚胎移植技術(shù)。之后，澳大利亞安哥拉山羊群的迅速擴(kuò)繁，美國(guó)、澳大利亞、新西蘭、德國(guó)等國(guó)波爾山羊群的建立和擴(kuò)大，都是利用MOET技術(shù)實(shí)現(xiàn)的。Holm（1990）用乙二醇作為防凍劑，將丹麥的270枚安哥拉山羊冷凍胚胎運(yùn)到新西蘭移植，獲得54%的胚胎成活率。McKlvey等人（1992年）也用乙二醇作為防凍劑，將俄羅斯的絨山羊冷凍胚胎運(yùn)到蘇格蘭移植，獲得53%的胚胎成活率和67%的受胎率。 實(shí)踐表明，MOET是所有先進(jìn)繁殖技術(shù)中最讓人困惑的技術(shù)，因?yàn)镸OET的結(jié)果有很大的變異性。在標(biāo)準(zhǔn)操作程序沒有變化的情況下，其結(jié)果可以從完全失敗到完全成功之間變化。造成這種技術(shù)不可預(yù)知性的主要原因是：超數(shù)排卵響應(yīng)的變異性，與超數(shù)排卵高響應(yīng)有關(guān)的低受精率，黃體的早期退化。這種不可預(yù)知的結(jié)果，加之胚胎收集和移植的高成本和需要外科手術(shù)，就阻止了MOET在山羊改良中的大規(guī)模運(yùn)用。 在成功的MOET操作中，平均每只供體母羊可得到6~8枚可移植胚胎�？墒�，上述結(jié)果因?yàn)楹芏嘁蛩兀ㄈ缙贩N、年齡和營(yíng)養(yǎng)）而有很大的變異性。每只供體母羊的可移植胚胎數(shù)的變化范圍為0~30枚，有25%~50%供體母羊的可移植胚胎因受精失敗和黃體的早期退化而移植失敗。 超數(shù)排卵響應(yīng)的變異性反映出在開始用促性腺激素處理時(shí)，存在不受標(biāo)準(zhǔn)超數(shù)排卵方案控制的卵泡群(Gonzalez-Bulnes et al., 2003)。這表明可采用一些辦法在FSH處理時(shí)避免存在大卵泡和增加新的小卵泡。其中的辦法包括使用促性腺激素釋放激素（GnRH），以及在誘導(dǎo)發(fā)情后馬上使用促卵泡素（FSH）。超數(shù)排卵處理前一周用澳大利亞的Buserelin埋植物進(jìn)行預(yù)處理并不能提高卵母細(xì)胞和胚胎供體的響應(yīng)(Baldassarre et al.,2001)。很可能GnRH預(yù)處理需要超過一周的時(shí)間才能抵消垂體促性腺激素的影響，使卵巢產(chǎn)生大量的小卵泡。在超數(shù)排卵處理前用Antarelix（GnRH拮抗劑）進(jìn)行10天預(yù)處理，結(jié)果在用FSH處理時(shí)增加了小卵泡的數(shù)量和排卵數(shù)(Cognié et al., 2003)。可是，這種超數(shù)排卵響應(yīng)的改進(jìn)并沒有產(chǎn)生大量可移植胚胎，其原因是受精率低（大于30%）。近來又有人提出“零天方案”來避免大卵泡的有害影響，并提高超排效果(Menchaca et al.2002)。這種方案是基于在排卵后馬上用FSH進(jìn)行處理，使超排后的黃體數(shù)增加30%，但是這個(gè)方案只對(duì)少數(shù)的母羊進(jìn)行過試驗(yàn)。而且還沒有報(bào)導(dǎo)回收胚胎的數(shù)量和質(zhì)量。 受精率低的部分原因是同期發(fā)情后精子在生殖道的輸送能力下降(Evans and Armstrong, 1984)，以及輸精和排卵的時(shí)間不吻合。上述第一個(gè)問題可通過子宮內(nèi)（腹腔鏡）輸精予以解決。第二個(gè)問題的解決是在發(fā)情和人工授精時(shí)通過GnRH處理來改進(jìn)同期排卵，這在前面已述及。Baril et al. (1996)對(duì)超排母羊的同期排卵進(jìn)行了改進(jìn)，即在取出陰道栓后12小時(shí)給予GnRH拮抗劑，在24小時(shí)后給予促黃體素（LH）。在同批處理的母羊供體中有30%的個(gè)體可能出現(xiàn)黃體早期退化(Pintado et al.,1998)。如果利用腹腔鏡在手術(shù)前評(píng)定超排響應(yīng)，當(dāng)出現(xiàn)明顯的黃體早期退化時(shí)，就不應(yīng)進(jìn)行沖卵。因?yàn)樵诖蠖鄶?shù)情況下，回收的幾乎都是未受精的或者退化的卵。黃體早期退化的原因還不完全了解。但是黃體早期退化與營(yíng)養(yǎng)缺乏、馬絨毛膜促性腺激素的超排和應(yīng)激等因素有關(guān)。Battye et al. (1988)證實(shí)，前列腺素涉及到黃體的早期溶解，建議在排卵和回收胚胎之間的時(shí)間使用氟胺煙酸甲基葡胺，目的是增加可移植胚胎的回收率。其它防止黃體早期退化的方法是避免利用馬絨毛膜促性腺激素進(jìn)行超排(Armstrong and Evans, 1983)，以及利用絨毛膜促性腺激素/GnRH進(jìn)行排卵處理3~4天，目的是中和大卵泡的負(fù)效應(yīng)(Saharrea et al.,1998)。 4 腹腔鏡活體采卵及胚胎的體外生產(chǎn) 利用腹腔鏡采集未成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行胚胎的體外生產(chǎn)就能夠克服與標(biāo)準(zhǔn)MOET技術(shù)有關(guān)的一些問題。這種方法可以多次使用，因?yàn)樗膭?chuàng)傷小于采集子宮階段胚胎的手術(shù)方法。此外，這種方法還可以避免造成超排不良后果的一些因素，如像排卵率低、黃體早期退化和受精率低等。這種方法的可靠性和可重復(fù)性都較好。對(duì)促性腺激素的響應(yīng)存在個(gè)體變異，而活體采卵方法對(duì)每個(gè)供體幾乎都能抽吸出5個(gè)以上的卵母細(xì)胞。這種方法能夠從不能利用人工授精或MOET進(jìn)行繁殖的個(gè)體，如從未性成熟個(gè)體獲得后代�；铙w采卵還能很好地為DNA顯微注射（產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因個(gè)體）或核轉(zhuǎn)移的胞質(zhì)受體提供合子。 Snyder and Dukelow在1974年首次進(jìn)行了活體采卵，他們利用腹腔鏡從綿羊的21個(gè)卵泡抽吸到6個(gè)卵母細(xì)胞。但是在發(fā)展出胚胎的體外生產(chǎn)技術(shù)之前，并沒有充分認(rèn)識(shí)到活體采卵技術(shù)的巨大潛力。 活體采卵的方法簡(jiǎn)介如下：供體山羊被控制在標(biāo)準(zhǔn)的腹腔鏡臺(tái)上，給予全麻。利用一根通過塑料管與采集管相連的針和真空管，在腹腔鏡的觀察下對(duì)卵泡進(jìn)行抽吸。當(dāng)有經(jīng)驗(yàn)的操作者進(jìn)行抽吸時(shí)，根據(jù)被抽吸的卵泡數(shù)量，每只母羊的操作時(shí)間為10~20分鐘，在2~3小時(shí)內(nèi)可采集100枚以上的卵母細(xì)胞。 為了采集到優(yōu)級(jí)的卵母細(xì)胞，需要用促性腺激素對(duì)供體母山羊進(jìn)行同期發(fā)情處理。通常是在腹腔鏡活體采卵前10天，將含有60毫克甲孕酮的陰道海綿栓插入陰道，在插入第八天的早晨給予125微克的Es?鄄trumate (加拿大)。對(duì)山羊和綿羊均有人作過不同激素的試驗(yàn)。其中包括多次注射FSH的方法和一次使用FSH+eCG的方法（腹腔鏡活體采卵前36小時(shí)）。H. Baldassarre等人采用一次使用FSH+eCG的方法，在4年中實(shí)施腹腔鏡活體采卵1580次，共采集卵母細(xì)胞21219枚，平均每只母山羊13.4枚，平均采卵率約為80%。 腹腔鏡活體采出的卵母細(xì)胞在體外成熟和體外受精簡(jiǎn)介如下：體外成熟是在含有TCM199的50微升懸滴中加入10%休情期山羊血清，并在含有5%二氧化碳、溫度為39度的恒溫恒濕孵化箱中培養(yǎng)24~27小時(shí)，體外受精是在含有TALP的50微升懸滴中加入20%休情期山羊血清，并在含有5%二氧化碳、溫度為39度的恒溫恒濕孵化箱中進(jìn)行受精。授精的新鮮精液濃度為每毫升含1X106精子。兩種配子在箱中共同培養(yǎng)15~20小時(shí)。所產(chǎn)生的受精卵或者用于移植到同期受體羊的輸卵管，或者進(jìn)一步培養(yǎng)到發(fā)育的子宮階段。H. Baldassarre等人將體外受精24小時(shí)內(nèi)的胚胎移植到受體羊，出生的山羊羔數(shù)占卵母細(xì)胞的比例為10%~20%。 腹腔鏡活體采卵及胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)在商業(yè)上的重要價(jià)值在于使高遺傳價(jià)值山羊在性成熟之前就能產(chǎn)生很多的后代，也就是所謂的母羔體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)。這種技術(shù)能夠縮短世代間隔，并且用促性腺激素處理母羔后的卵泡響應(yīng)特別顯著。采用前述的一次性處理方法，不需要進(jìn)行同期發(fā)情處理，母羔所采集的卵母細(xì)胞幾乎是成年母羊的兩倍。 值得注意的是，這種技術(shù)運(yùn)用于100日齡母羔的情況下，當(dāng)它產(chǎn)生的后代出生時(shí)，這些供體母羔才達(dá)到正常的繁殖年齡。因而JIVET技術(shù)是腹腔鏡活體采卵及體外胚胎生產(chǎn)的最為有效的運(yùn)用，因?yàn)檫@種技術(shù)能夠縮短世代間隔，加快遺傳進(jìn)展，產(chǎn)生大量的高價(jià)值后代。 5 轉(zhuǎn)基因的克隆技術(shù) 山羊是生產(chǎn)重組蛋白特別有效的動(dòng)物，因?yàn)樯窖虻漠a(chǎn)奶量不低，投入和維持成本相對(duì)于奶牛較低。奶山羊的產(chǎn)奶量一般為600~800公斤。因而藥用蛋白的產(chǎn)量也不低。如100只轉(zhuǎn)基因山羊可生產(chǎn)100公斤單克隆抗體，75只轉(zhuǎn)基因山羊可生產(chǎn)75公斤ATⅢ（抗凝血酶）。其次，如果采用顯微注射的方法生產(chǎn)藥用蛋白，奶山羊從最初的顯微注射到開始含有藥物蛋白的泌乳所需時(shí)間是16到18個(gè)月（妊娠+生長(zhǎng)到性成熟+妊娠），而牛則需要大約3年。由此可見，山羊是生產(chǎn)重組蛋白特別有效的生物反應(yīng)器�，F(xiàn)在，轉(zhuǎn)基因山羊已經(jīng)能夠生產(chǎn)大量的藥用蛋白，也能夠從奶中將其提純和進(jìn)行生物學(xué)測(cè)定。有幾種產(chǎn)品已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)，不久就可進(jìn)入市場(chǎng)（Meade等人，1999）。例如，轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)的ATⅢ已進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)，預(yù)計(jì)2004年可進(jìn)入市場(chǎng)；轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)的t-PA已進(jìn)入Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗(yàn)，預(yù)計(jì)2006年可進(jìn)入市場(chǎng)。 產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因山羊的傳統(tǒng)方法是將DNA結(jié)構(gòu)顯微注射到體內(nèi)來源的前核期受精卵中(Ebert et al., 1991)。這種方法是可靠的，但是效率太低。因?yàn)檫@種隨機(jī)整合造成了轉(zhuǎn)基因結(jié)果的未知性（通常出生的轉(zhuǎn)基因羔羊少于10%），以及表達(dá)的未知性（通常每升奶中的重組蛋白為0~10克）。原因是位置效應(yīng)的作用，即染色體上各個(gè)基因不僅獨(dú)立發(fā)生作用，相鄰基因還能共同發(fā)生作用和相互影響（Wall等人，1996）。已有報(bào)導(dǎo)利用腹腔鏡活體采卵，通過體外生產(chǎn)受精卵，再進(jìn)行前核期顯微注射來產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因羊（Baldassarre et al.,2003a)。這種方法增加了每只供體羊的采卵次數(shù)，能夠較好地預(yù)知產(chǎn)生的胚胎（卵）數(shù)，能夠控制對(duì)于成功整合起關(guān)鍵作用的受精時(shí)間和DNA顯微注射時(shí)間。在出現(xiàn)第一只克隆綿羊之后（Wilmut et al., 1997），就有可能通過體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移來進(jìn)一步提高產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因山羊的效率。這種方法可以將DNA結(jié)構(gòu)摻入到靶細(xì)胞中，隨后根據(jù)整合的情況選擇用于轉(zhuǎn)移的供體細(xì)胞。雖然核轉(zhuǎn)移重組胚胎的繁殖效率大大低于傳統(tǒng)的前核期顯微注射方法（因?yàn)榍耙环N方法的受胎率低和較高的死羔率），但是前一種方法所出生的羔羊都是轉(zhuǎn)基因個(gè)體，它們幾乎都能生產(chǎn)高價(jià)值的奶重組蛋白(Baldassarre et al., 2003b, 2004b; Wheeler et al., 2003)。 轉(zhuǎn)基因和體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移技術(shù)的運(yùn)用能夠使奶、肉和馬海毛這樣的經(jīng)濟(jì)性狀改進(jìn)，但尚未看到這方面的報(bào)導(dǎo)。除非是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因羊和克隆羊的技術(shù)效率和成本有了非常大的改進(jìn)，這種技術(shù)還不可能廣泛用于山羊生產(chǎn)性能的提高。 總的來說，同期發(fā)情和人工授精是山羊遺傳改進(jìn)中運(yùn)用最為廣泛的先進(jìn)繁殖技術(shù)，這是由于它們的技術(shù)簡(jiǎn)單、成本相對(duì)較低，而效率卻高。MOET的廣泛運(yùn)用還需要提高其重復(fù)性和降低它的生產(chǎn)成本。MOET將會(huì)繼續(xù)運(yùn)用于原種群的繁殖，特別是用于高遺傳價(jià)值山羊的國(guó)際貿(mào)易。腹腔鏡活體采卵和胚胎體外生產(chǎn)對(duì)于高價(jià)值山羊的繁殖可能更為有效，但是這種技術(shù)的利用受限于較之MOET需要更為苛求的實(shí)驗(yàn)室條件。腹腔鏡活體采卵運(yùn)用于高價(jià)值母羔的高效繁殖具有其特殊的意義。JIVET技術(shù)與進(jìn)口貴重山羊冷凍胚胎結(jié)合起來，具有非常大的經(jīng)濟(jì)效益。在這種情況下，從冷凍胚胎出生的母羔在性成熟之前可以進(jìn)行幾次腹腔鏡活體采卵，從而達(dá)到快速繁殖的目的。這對(duì)于新引進(jìn)品種（品系）發(fā)展的早期階段特別重要。奶、肉和馬海毛這樣的山羊生產(chǎn)性狀的提高可能受益于轉(zhuǎn)基因技術(shù)。但是，對(duì)于該技術(shù)廣泛運(yùn)用于提高這些生產(chǎn)性狀的來說，還有待于識(shí)別出對(duì)特定性狀產(chǎn)生影響的基因，并提高這種技術(shù)的效率，以及使達(dá)到和評(píng)估這種遺傳進(jìn)展的成本降低�？寺〖夹g(shù)也能夠提高轉(zhuǎn)基因技術(shù)在上述運(yùn)用中的效率。但是需要解決高成本、妊娠率低和成活率低的問題和缺乏遺傳多樣性的問題后，它才能作為家畜改良方法運(yùn)用于生產(chǎn)。 |
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